苯丙氨酸解氨酶試劑盒說(shuō)明書(shū)
紫外分光光度法
貨號(hào)：YJS2205 規(guī)格：50管/48樣
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
PAL（EC4. 3 1 5）廣泛存在于各種植物和少數(shù)微生物中，是植物體內(nèi)苯丙烷類(lèi)代謝的關(guān)鍵酶，與一些重要的次生物質(zhì)如木質(zhì)素、異黃酮類(lèi)植保素、黃酮類(lèi)色素等合成密切相關(guān)，在植物正常生長(zhǎng)發(fā)育和抵御病菌侵害過(guò)程中起重要作用。PAL催化L-苯丙氨酸裂解為反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在290nm處有大吸收值，通過(guò)測(cè)定吸光值升高速率計(jì)算PAL活性。
試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1ml比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體40mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×3瓶，4℃保存，臨用前每瓶加入4mL雙蒸水充分溶解待用；現(xiàn)配現(xiàn)用。
試劑三：液體2.5mL×1瓶，4℃保存；
操作步驟：
一、粗酶液提取：
稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。10000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
二、測(cè)定操作表：
試劑名稱(chēng) | 測(cè)定管（μL） | 對(duì)照管（μL） |
樣本 | 20 |
|
試劑一 | 780 | 800 |
試劑二 | 200 | 200 |
混勻，30℃準(zhǔn)確水浴30min | ||
試劑三 | 40 | 40 |
混勻，靜置10min后，用對(duì)照管調(diào)零，290nm處記錄測(cè)定管吸光值A(chǔ) (A=A測(cè)定管-A對(duì)照管)。
PAL活性計(jì)算：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白在每ml反應(yīng)體系中每分鐘使290nm下吸光值變化0.1定義為一個(gè)酶活力單位。
PAL（U/mg prot）=A×反應(yīng)總體積（1040μL）÷樣本體積（20μL）÷反應(yīng)時(shí)間(30min)÷0.1 ÷蛋白濃度（mg/mL）=17.3×A ÷蛋白濃度（mg/mL）
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織在每ml反應(yīng)體系中每分鐘使290nm下吸光值變化0.1定義為一個(gè)酶活力單位。
PAL（U/g 鮮重）=A×反應(yīng)總體積（1040μL）÷﹝樣本鮮重（g）×樣本體積（20μL）÷V樣總（1mL）﹞÷反應(yīng)時(shí)間(30min)÷0.1 =17.3×A ÷樣本鮮重（g）
