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 SDS-PAGE分離膠緩沖液（4×）說(shuō)明書

Separating Gel Solution (4×)

目錄號(hào)：K0026

保存條件：2-8℃保存。

組分說(shuō)明

             Cat No.          K0026A

             Volume              500 ml

本產(chǎn)品僅供科研使用，請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途  

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

　　本產(chǎn)品為配制 SDS-PAGE分離膠緩沖液，可用于配制各種濃度的變性及非變性

PAGE凝膠，方便、快捷。產(chǎn)品中已加入10%SDS,使用時(shí)不用另外加入。

操作步驟

根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的PAGE分離膠配制濃度，J膠濃度請(qǐng)參考附表1。

 I 灌制分離膠（各試劑使用量請(qǐng)參考附表2）

1．參照凝膠模具說(shuō)明書，裝配好凝膠模具。

   注：加入上層篩板有助于加樣時(shí)保持填料與樣品均勻接觸，是否加入上層篩板可根據(jù)實(shí)際情況選擇。

2．將不同體積的30%Acr-Bis(29:1)、分離膠緩沖液和雙蒸水在小燒杯或試管中混合。

3．加入10%APS和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。

4．在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液（對(duì)于 mini-gel，凝膠液加至約距前玻璃板頂端

   1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可），然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-5 cm的水層，

   使凝膠表面保持平整。

5．靜置30-60分鐘，待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面后，表面凝膠已聚合。

 II灌制濃縮膠（各試劑使用量請(qǐng)參考附表3）

1．去除覆蓋在分離膠上的水層。

2．將不同體積的30%Acr-Bis(29:1)、濃縮膠緩沖液和雙蒸水在一個(gè)小燒杯或試管中混

   合。

3．加入10%過(guò)硫酸銨和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。

4．將濃縮膠溶液加至分離膠的上面，直至凝膠溶液到達(dá)前玻璃板的頂端。

5．將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。

6．靜置10~20分鐘，等待濃縮膠聚合。

7．待凝膠聚合后，小心地拔出梳子，以免破壞加樣孔。

8．進(jìn)行常規(guī)電泳操作。

 附表

                   附表1. SDS-PAGE分離膠的濃度與理想分離范圍

          SDS-PAGE分離膠濃度           理想分離范圍

         6%膠                        50-150 kD

         8%膠                        30-90 kD

         10%膠                        20-80 kD

          12%膠                       12-60 kD

          15%膠                       10-40 kD

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