Easy-Lowry蛋白定量試劑盒說明書
Easy-Lowry Protein Assay Kit
Easy-Lowry蛋白定量試劑盒
目錄號：K2341
保存：BSA 標準品：2-8℃
其 它 組 分：室 溫
組分說明
Cat. No. K2341
Kit Size 1000 次/微孔，50 次/試管
試劑 A 50 ml
試劑 B 25 ml
BSA 標準品 （2 mg/ml） 2 ml
產(chǎn)品簡介
Easy-Lowry 蛋白定量試劑盒是一種操作簡便快捷的 Lowry 法蛋白定量試劑盒，可用于多種不同緩沖系統(tǒng)以及各種不同蛋白質的定量檢測。Easy-Lowry 蛋白定量試劑盒是在 Improved-Lowry 蛋白定量試劑盒基礎上進行優(yōu)化改良的產(chǎn)品，其保留了Improved-Lowry 抵抗干擾能力較強的優(yōu)點，并進一步簡化了操作步驟，減少了檢測時間，并且能得到與mproved-Lowry 蛋白定量接近的定量結果，其檢測范圍為 0-2000 μg/ml。
注意事項
1. 本產(chǎn)品可以采用分光光度計（試管檢測法）或者酶標儀（微孔檢測法）測定蛋白濃度。
2. 建議每次測定蛋白樣品時，繪制標準曲線，以獲得準確數(shù)據(jù)。
3. BSA 標準品的稀釋液需與待測樣品的稀釋液一致（可用 1×PBS 或 0.9%生理鹽水稀釋）。
4. 如待測樣品中含較多的干擾物質（具體見附表 1），可采用 Bradford 法蛋白定量試劑盒（K0013）或其他蛋白定量產(chǎn)品。
操作步驟
1. 稀釋 BSA 標準品：用與待測蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋 BSA 標準品。
管號 稀釋液用量（μl）BSA標準品用量（μl） BSA標準品終濃度（μg/μl）
A 0 200 2
B 200 200 1
C 200 200（從B管中取） 0.5
D 200 200（從C管中取） 0.25
E 200 200（從D管中取） 0.125
F 200 0 0（空白）
2. 稀釋試劑 B：將試劑 B 用去離子水稀釋 8 倍混勻待用。
3. 定量檢測：
3a. 試管檢測法（蛋白濃度檢測范圍：0-2 μg/μl）
1）按上表，將稀釋好的 A-F BSA 標準品和待測蛋白樣品（原液或稀釋液）各 200 μl分別加到作好標記的試管中。
2）向各試管中加 1 ml 試劑 A 迅速振蕩混勻，室溫準確放置10分鐘。
3）向各試管中加入4 ml 稀釋過的試劑 B，迅速在渦旋儀上混勻，室溫靜置30分鐘。
4）用分光光度計測定750 nm下的吸光度值。
5）繪制標準曲線，計算樣品中的蛋白濃度。
3b. 微孔檢測法（蛋白濃度檢測范圍：0-2 μg/μl）
1）按上表，將稀釋好的 A-F BSA 標準品和待測蛋白樣品（原液或稀釋液）各 5 μl 分別加到作好標記的 96 孔板微孔中。
2）向各微孔中加 50 μl 試劑 A，迅速用酶標儀振蕩混勻，室溫準確放置 10 分鐘。
3）向每孔中加入 200 μl 稀釋過的試劑 B，迅速用酶標儀振蕩混勻，室溫靜置 30 分鐘。
4）用酶標儀測定 750 nm 下的吸光值。
5）繪制標準曲線，計算樣品中的蛋白濃度。
注意：
1）建議以去除背景值后的吸光值讀數(shù)繪制標準曲線。
2）由于操作誤差導致標準品讀數(shù)嚴重偏離線性曲線的應舍去。
3）未知樣品濃度可以從標準曲線方程中計算得出, 實際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。
4）如果得到的蛋白濃度不在檢測范圍內，請重新稀釋樣品后再次測定。
附表 1.干擾物附表
化合物 耐受濃度 化合物 耐受濃度
緩沖液 去垢劑及變性劑
磷酸鉀 0.03 M 去氧膽酸鈉 0.0625%
甘氨酸 0.25 mM CHAPS 1 mM
HEPES 2.5 μM 辛葡糖 干擾
MES 25 μM SDS 1.25%
MOPS 25 μM Triton X-100 0.25%
Na +-檸檬酸 2.5 μM 糖類
PIPES 5 μM 葡萄糖 30 mM
磷酸鈉 0.25 μM 蔗糖 10 μM
螯合劑
TES 1 mM
Tris 250 μM EDTA 125 μM
鹽類 EGTA 干擾
還原劑
硫酸銨 28 μM
NaCl 30 μM β-巰基乙醇 1.75mM
尿素 200 μM DTT 50 μM
其他
極性化合物
丙酮 1.25% 丙烯酰胺 1.25 mg/ml
DMSO 6.20% DNA 190 μg/ml
乙醇 12.50% 脂類 25mM
1,2-亞乙基二醇 0.25% 兩性電解質 干擾
甘油 25% 中性 TCA 12.5 mg/ml
實驗代做服務：
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